地衣類と化学分類：薄層クロマトグラフィー

３－３．薄層（はくそう）クロマトグラフィー（TLC）Thin-layer chromatography

地衣類の分類や同定する際に，地衣成分を同定するための標準的な方法を紹介します．

3-3-1．プレートの準備まで

標本から試料を取り，ミクロチューブで抽出する

・ミクロチューブ：　内径8～10mm程度のものを使用する

・ガラス毛細管：　市販のものとしては，ヘマトクリット毛細管で良い．これよりもう少し細い方が使い勝手が良いが，それには，ガラス管を伸ばして製作する必要がある．

実体顕微鏡下でごみを取り除いた試料（葉状地衣・樹状地衣なら標本から切り出し，痂状地衣なら削り出す）（矢印）をミクロチューブに入れ，数滴のアセトンを加えて抽出する．ミクロチューブには，標本番号を記したメンディングテープを貼り，TLCプレートにスポットを打つためのガラス毛細管を入れた状態．

TLCプレートの準備

・TLCプレート：　メルク社製Kieselgel 60 F254を使用する

プレートの下端（写真では手前）から2cmに線を引き，両脇2cmを開けて，17点を1cm間隔で記す（それぞれに抽出しスポットを打つ標本の番号など記す）．その線から10cm上（写真では奥）に鉛筆で線を強く引いてそこのシリカゲル層を削り落とす．

プレートにスポットを打つ（スポッティング）

　　※　ここでは同じプレートを3枚作る例を示した．


ガラス毛細管で，ミクロチューブのアセトン（地衣成分が溶けていると期待される）を，プレート上に打つ．	ここでは同じプレートを3枚用意している．（後に溶媒A，B´，Cで１枚ずつ展開する）	スポットを打ち終わった3枚

スポットを打った3枚のプレートを紫外線（短波長）下で検査する．

スポットした箇所に十分な地衣成分があると，黒っぽく見える．不十分な箇所については，さらにスポットを打つ．（※単純に地衣成分が多ければ多いほど良いというわけではない）

これでプレートの準備は完了．